Ziehl Neelsen Equipo

Equipo de coloración de bacilos ácido-alcohol resistente.

Fundamento
La propiedad que presentan algunas bacterias de resistir la decoloración con ácidos fuertes después de ser teñidos con solución de fucsina caliente, permite reunirlas bajo la denominación general de bacterias ácido alcohol resistente. El género Mycobacterium, incluido en esta clasificación, comprende especies patógenas para el hombre, animales y especies saprófitas. El grado de ácido-alcohol resistencia es variable entre los distintos grupos y no puede usarse esta propiedad con fines taxonómicos. Con esta coloración, los bacilos ácido-alcohol resistentes aparecen rojos, mientras que otros gérmenes y células toman distintos tonos de azul.

Reactivos
1) CARBOLFUCSINA:
Solución de fucsina básica (3 g de fucsina básica en 100 ml de alcohol etílico 95%); 10 ml de solución de fenol al 5%, 90 ml.

2) ALCOHOL-ACIDO:
Solución de alcohol etílico 95% conteniendo 3 ml de ácido clorhídrico.

3) COLORANTE DE CONTRASTE:
Solución acuosa al 0.3% de azul de metileno.

Técnica
El material a estudiar debe extenderse con ansa en portaobjetos delgados y nuevos, previamente desengrasados. La existencia de cualquier anfractuosidad o rayadura en el vidrio, podrá ser causa de confusión en la observación.

Preparación de extendidos
Es conveniente efectuar siempre un examen directo y homogeneizado. Para la homogeneización se añade un volumen equivalente de NaOH 4% al material en estudio. Se coloca en estufa a 37°C durante 15 a 30 minutos y se centrifuga a 3.000 rpm durante 20 minutos. Se vuelca el sobrenadante y se realiza el extendido del centrifugado con ansa. Una vez realizado el extendido se deja secar al aire o en estufa de cultivo.

Procedimiento
Fijar los preparados por calentamiento suave flameándolos sobre la llama. Coloque un pequeño trozo de papel de filtro un poco más largo que el tamaño del preparado sobre el portaobjeto. Cubra todo el portaobjeto con carbolfucsina y flamee por debajo del portaobjeto hasta desprendimiento de vapores blancos (cuidar que no entre en ebullición por exceso de calor). Deje enfriar 5 minutos y repíta el flameado con llama, hasta nuevo desprendimiento de vapores blancos. Volver a dejar 5 minutos. Cuando ya esté frío, remover el papel de filtro y lavar con agua destilada. Decolorar con alcohol-ácido en sucesivos lavados hasta que no se desprenda más colorante (alrededor de 2 minutos; para preparados más gruesos puede requerirse más tiempo). Lavar con agua destilada y colorear con azul de metileno alrededor de 30 segundos. Lavar con agua destilada y secar al aire.

Resultados
Los bacilos ácido-alcohol resistentes aparecen rojos, mientras que otros gérmenes o células toman distintas tonalidades de azul.

Observaciones
Algunas drogas utilizadas en el tratamiento de la tuberculosis, hacen perder la ácido-resistencia de los bacilos, observándose esta característica de las cepas sensibles a la isoniazida y a la alfa etiltioisonicotinamida (ethionamida).


Presentación

Equipo de Ziehl Neelsen
x 100 ml      Código: B14-461-82

Dec. para Ziehl Neelsen
x 500 ml      Código: B14-459-62