Gram Britania
Equipo para la coloración de Gram
Fundamento
La coloración de Gram ha constituido, desde los albores de la Bacteriología, un elemento fundamental para la taxonomia e identificación. Luego del descubrimiento casual realizado por el investigador danés Christian Gram, pasaron muchos años durante los cuales se efectuaron las más variadas especulaciones sobre el mecanismo de esta coloración. Resultaba indudable, sin embargo, su practicidad a los fines de la identificación. El conocimiento de las estructuras de las membranas bacterianas, tanto en el aspecto físico como en su composición molecular que fueron logrados a partir de la década del sesenta, demostraron que la coloración de Gram distingue dos grupos de bacterias totalmente diferentes. Las bacterias Gram positivas que presentan una gruesa capa de peptidoglicano como estructura fundamental por sobre la membrana citoplasmática, y las Gram negativas, que encima de ésta, presentan una delgada capa de peptidoglicano, a la que se superpone una capa de lipopolisacáridos-lipoproteína, denominada membrana externa. La presencia de esta membrana diferencia actualmente dos divisiones en sistemática bacteriana: las que no lo poseen, Firmicutes (Gram +) y las que sí, Gracilicutes (Gram -). La diferencia entre ambos grupos es pues de enorme importancia taxonómica. El comportamiento como patógenos y en la sensibilidad antibacteriana difieren sustancialmente; de ahí que la realización rápida de una coloración de Gram, reviste enorme importancia en Bacteriología Clínica. Al realizar una coloración de Gram pueden cometerse errores por:
• Utilizar colorantes no certificados para bacteriología.
• Concentración inadecuada de colorantes certificados.
• Material muy concentrado (extendido demasiado gruesos).
• Metodología incorrecta. A los fines de evitar errores, es conveniente utilizar colorantes certificados para bacteriología y seguir atentamente la técnica de la coloración.
Metodología
• Cubrir con VIOLETA para Gram solamente las zonas del portaobjeto que tienen la preparación previamente fijada con alcohol metílico o calor. Dejar actuar 20 segundos.
• Lavar con chorro fino de agua durante unos 10 segundos.
• Cubrir con LUGOL para mordentar. Dejar 30 segundos.* Decolorar durante 10 segundos con DECOLORANTE haciendo presión en el frasco plástico, para que salga un chorro fino que arrastre el colorante.
• Lavar con chorro fino de agua 10 segundos.
• Cubrir con SAFRANINA. Dejar 20 segundos.
• Lavar con chorro fino de agua 10 segundos.
• Secar.
• Tiempo total de la coloración: 2 minutos.
Observaciones
Para un mejor fijado de los preparados, se recomienda cubrirlos con alcohol metílico durante un minuto. Esto evita la destrucción de los elementos por exceso de calor y ahorro de tiempo.
Cepas control
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Gram positivo
Escherichia coli ATCC 25922 Gram negativo
Presentación
Equipo Gram Britania en solución
x 100 ml Código: B14-460-82
Repuesto Gram Britania en solución
3 amp x 10 ml Código: B14-462-81
Violeta de Genciana en solución
3 amp x 10 ml Código: B14-464-21
Concentrado x 500 ml para 5 litros Código: B14-465-62
Lugol en solución
3 amp x 10 ml Código: B14-463-21
Concentrado x 500 ml para 5 litros B14-463-62Decolorante para Gram en solución
x 500 ml Código: B14-458-62
Safranina en solución
x 3 amp. x 10 ml Código: B14-452-21
Concentrado x 500 ml para 5 litros Código: 14-452-62
Cristal Violeta en polvo
x 25 g Código:B13-479-04
x 50 g Código: B13-479-10
x 100 g Código:B13-479-05
Safranina en Polvo
x 25 g Código: B13-478-04
x 50 g Código: B13-478-10
x 100 g Código: B13-478-05