Pyr - A - Enterococos.

Prueba rápida, utilizada fundamentalmente para la identificación de Streptococcus pyogenes y Enterococcus spp.
Es útil para la caracterización preliminar de Streptococcus, Enterococcus y de microorganismos símil estreptococos.

Fundamento
Los discos contienen el sustrato: pirrolidonil-beta-naftilamida, y la prueba consiste en determinar la presencia de la enzima l-pirrolidonil arilamidasa .
Los microorganismos que contienen dicha enzima, pueden hidrolizar el sustrato presente en los discos en forma rápida, con liberación del grupo pirrólico, el cual, reacciona con el reactivo revelador: N-N dimetilamino cinamaldehído.
Esta es una prueba presuntiva específica tanto para los estreptococos b hemolíticos del grupo A, como para los Enterococcus spp; y permite diferenciar los estreptococos del grupo A de otras especies de Streptococcus.
Es altamente sensible y reemplaza a la bacitracina y a la prueba de tolerancia a la sal (crecimiento en NaCl al 6.5%).
A menudo se usa esta prueba junto con la prueba de leucinaaminopeptidasa (LAP).
Debe tenerse en cuenta que algunas especies de Staphylococcus (S. lugdunensis, S. scheleiferi, S. haemolyticus y S. intermedius) son generalmente PYR positiva, por lo que se puede utilizar para diferenciar Staphylococcus.

Metodología

Siembra
A partir de un cultivo puro, hacer una suspensión densa en 50 µl de solución fisiológica estéril, y agregar un disco de PYR-A-ENTEROCOCOS .

Incubación
Durante 30 minutos a 35-37 °C, en aerobiosis.
Cuando se utiliza para diferenciar Staphylococcus, la incubación se debe realizar, según algunos investigadores, durante 2 horas a 35–37 ºC, en aerobiosis.
-Agregar una gota de reactivo revelador .
-Dejar a temperatura ambiente, hasta 5 minutos.

Resultados
Positivo: observación de color rosa-rojo en el disco.
Negativo: la suspensión y/o el disco permanecen incoloros o de color amarillo.

Microorganismos	Hemólisis	PYRasa	VANCOMICINA (30ug)	Disposición
Estreptococo grupo A	ß	+	S	Pares o cadenas
Estreptococo grupoB	ß, g, a	-	S	Pares o cadenas
Estreptococo grupo C	ß	-	S	Pares o cadenas
Estreptococo grupo G	ß	-	S	Pares o cadenas
S. grupo viridans	a, g	-	S	Pares o cadenas
Enterococcus spp.	a, ß , g	+	S	Pares o cadenas
Gemella spp.	a, g	+	S	Pares,tetradas, cadenas, acúmulos
Aerococcus viridans	a, g	+	S	Pares, tetradas, acúmulos
Pediococcus spp.	a, g	-	R	Pares, tetradas, acúmulos
Lactococcus spp.	a, g	-(2)	S	Pares o cadenas
Leuconostoc spp.	a , g	-	R	Pares o cadenas

Observaciones:	+: Más del 90% de las cepas presentan reacción positiva.
	-: Menos del 10% de las cepas presentan reacción positiva.
	* (2) Lactococcus garviae es la única especie de Lactococcus que da la prueba del PYR positiva.
	* Cualquier zona de inhibición alrededor del disco de vancomicina se considera sensible.

Limitaciones
Siempre se debe correlacionar los resultados positivos con las características de la colonia y la disposición en la coloración de Gram a partir de medio líquido, debido a que no solo los estreptococos Grupo A y Enterococcus spp. son los únicos microorganismos que dan positiva la prueba: algunas bacterias no hemolíticas tales como Aerococcus viridans (100%), algunas especies de lactobacillus (7%), algunas especies de gemella (73%), los estreptococos con deficiencia nutricional, algunas cepas de estreptococos Grupo C y G dan positiva la prueba, y Facklan encontró también, que el 4% de las cepas de S. viridans son positivas para la prueba PYR.

Almacenamiento
Conservar a 2-8 °C

Presentación
X 25 Discos*	B12-406-24

* Incluye Reactivo cinamaldehído