O.N.P.G.

Prueba rápida, utilizada para diferenciar los microorganismos fermentadores lentos de lactosa, de los no fermentadores.
Su uso es muy difundido para confirmar o descartar especies de Salmonella.

Fundamento
La lactosa puede ser fermentada de manera rápida (18-24 horas), en forma lenta, o puede no ser fermentada.
Los microorganismos que la fermentan rápidamente poseen 2 enzimas: b-galactósido permeasa, la cual está localizada en membrana celular y está involucrada en el transporte de la lactosa, y la b-D-galactosidasa, que es intracelular y está involucrada enla hidrólisis dela lactosa agalactosa y glucosa.
Los microorganismos fermentadores lentos de lactosa, son deficientes en b-galactósido permeasa pero no en b-D-galactosidasa, y los microorganismos no fermentadores no poseen ninguna de las 2 enzimas.
Los discos contienen O.N.P.G. (orto-nitrofenilgalactopiranosido), el cual tiene la característica entrar rápidamente al interior de la célula bacteriana, sin la necesidad de utilizar la b-galactósido permeasa, y allí es metabolizado por la b-D-galactosidasa, liberándose o-nitro-fenol, compuesto de color amarillo.

Metodología

Siembra
A partir de un cultivo puro, hacer una suspensión densa en 0.2 ml de solución fisiológica estéril, y agregar un disco de ONPG.

Incubación
Durante 30 minutos a 35-37°C, en aerobiosis.
Importante: se debe incubar hasta 4 horas antes de descartar una reacción como negativa
-Observación del color de la suspensión.

Resultados
Positivo: observación de color amarillo en la suspensión.
Negativo: la suspensión permanece sin cambio de color.

Microorganismo	ONPG
Escherichia coli ATCC 25922	+
Citrobacter freundii	+
Klebsiella pneumoniae ATCC 700603	+
Salmonella typhimurium ATCC 14028	-
Proteus mirabilis ATCC 43071	-

Limitaciones
Junto con la realización de la prueba, se recomienda usar control positivo y negativo

Almacenamiento
Guardar los discos al abrigo de la luz.
-Conservar a 2-8 °C

Presentación
X 50 Discos	B12-401-27