LAP.

Discos para detectar actividad leucinoaminopeptidasa.
En los últimos años se han introducido pruebas simples y rápidas para la identificación presuntiva de cocos Gram positivos, catalasa negativa, no productores de beta hemólisis. Estas bacterias que son aerobias y anaerobias facultativas, pueden ser resistentes a la vancomicina. Entre las especies que presentan estas características y tienen resistencia natural al antibiótico se encuentran Leuconostoc spp. y Pediococcus spp., los cuales se están aislando frecuentemente en materiales clínicos. Las pruebas usadas para identificarlas son complejas, a veces requieren varios días para completarlas y poder diferenciar de esta manera de Enterococcus spp., microorganismo que puede adquirir resistencia a vancomicina y ser de interés epidemiológico.
Laboratorios Britania introduce los discos LAP para detectar actividad leucinoaminopeptidasa, que junto a los discos de Vancomicina 30 µg (B11-340-27) y PYR-A-Enterococos (B12-406-24) facilitan el diagnóstico de este grupo de microorganismos.

Fundamento
Los discos contienen el sustrato: leucina-b-naftilamida, y la prueba consiste en determinar la presencia de la enzimaleucino aminopeptidasa (LAP).
Los microorganismos que contienen dicha enzima, pueden hidrolizar el sustrato presente en los discos en forma rápida, con liberación de b-naftilamina, la cual, reacciona con el reactivo revelador: N-N dimetilamino cinamaldehído.

Metodología

Siembra
A partir de un cultivo puro en agar sangre, del cual se sabe que son cocos Gram positivos, catalasa negativa, hacer una suspensión densa en 50 µl de solución fisiológica estéril, y agregar un disco de LAP.
Se recomienda efectuar en forma simultánea el ensayo de sensibilidad al disco de Vancomicina 30 µg y la prueba con el disco de PYR-A-Enterococos.
-Agregar una gota de reactivo revelador.
-Dejar a temperatura ambiente, hasta 5 minutos.


Incubación
Durante 30 minutos a 35-37 °C, en aerobiosis.

Resultados
- LAP Positivo: Disco color rosado a rojo.
- LAP Negativo: Disco y/o solución color amarillo o incoloro.
- Prueba de la sensibilidad a la Vancomicina: cualquier zona de inhibición alrededor del disco de vancomicina se considera positiva (vancomicina sensible).

Microorganismo	Vancomicina (30 µg)	LAPasa	PYRasa
Cocos Gram positivos en cadenas
Streptococcus grupo viridans	S	+	-
S. bovis	S	+	-
V.N.E *	S	+	+
Enterococcus spp.	S	+	+
Enterococcus spp.	R	-	+
Lactococcus spp.	S	+	+/-
Globicatella sanguis	S	-	+
Leuconostoc spp.	R	-	-
Cocos gram positivos en pares, tetradas y acúmulos
Aerococcus viridans	S	-	+
Aerococcus urinae	S	+	-
Helcococcus kunzii	S	-	+
Alloiococcus otitis	S	+	+
Gemella spp.	S	+	+
Pediococcus spp.	R	+	-

* V.N.E = variantes nutricionales de estreptococos. (Abiotrophia spp)

Limitaciones
Algunas cepas de enterococos, particularmente E. avium y E. raffinosus pueden no producir LAPasa.

Almacenamiento
Conservar a 2-8 °C

Presentación
X 25 Discos*	B12-414-24

* Incluye Reactivo cinamaldehído