Violeta Rojo y Bilis Agar.

Este es un medio selectivo para la investigación presuntiva y recuento de coliformes en alimentos y productos lácteos.

Fundamento
En el medio de cultivo, la peptona y el extracto de levadura aportan los nutrientes necesarios para el crecimiento bacteriano,las sales biliares y el cristal violeta inhiben el desarrollo de la flora Gram positiva, la lactosa es el hidrato de carbono fermentable, y el rojo neutro es el indicador de pH.
Los coliformes son bacterias que fermentan la lactosa, acidifican el medio y producen un viraje del indicador de pH al color rojo intenso. Debido a esto, se observan como colonias de color rojo púrpura, de 1 a2 mm de diámetro, rodeadas, generalmente, de una zona rojiza de bilis precipitada.

Fórmula (en gramos por litro)		Instrucciones
Extracto de levadura	3.0	Suspender 41,5 g del polvo por litro de agua destilada. Reposar 5 minutos y mezclar, calentando a ebullición 1 o 2 minutos. Enfriar a 45°C y verter en placas. Una vez preparado debe usarse de inmediato. NO AUTOCLAVAR.
Peptona	7.0
Sales biliares	1.5
Lactosa	10.0
Cloruro de sodio	5.0
Agar	15.0
Rojo neutro	0.03
Cristal violeta	0.002
pH final: 7.4 ± 0.2

Siembra
-Para recuento bacteriano: sembrar en profundidad 1ml de la muestra directa o de la dilución apropiada, agregar aproximadamente 12-15 ml de medio de cultivo enfriado a 45 ºC, agitar por rotación y dejar solidificar.
Luego, agregar una sobre capa de medio de cultivo para crear condiciones anaeróbicas de manera que se evite el crecimiento de microorganismos Gram negativos no fermentadores de azúcares y el crecimiento en forma invasiva de Proteus spp.
-Para propósitos generales: sembrar en superficie, una ansada a partir de los tubos con gas de un medio para coliformes (por ejemplo de Verde Brillante Caldo y Bilis 2% ó Mac Conkey Caldo ó Lauril Sulfato Caldo)

Incubación
Para la detección de Enterobacterias mesófilas, incubar a 30ºC durante 24 horas. Se puede aumentar la selectividad incubando a 42 ºC.

Resultados

Microorganismos	Colonias
Enterobacterias fermentadoras de lactosa	Rojas, de 1 a 2 mm de diámetro, con halo de precipitación rojizo
Enterobacterias no fermentadoras de lactosa	Incoloras
Enterococcus spp.	Rosadas como punta de alfiler (puntiformes)

Características del medio
Medio preparado: púrpura rojizo.

Almacenamiento:
Medio deshidratado: a 10-35 ºC.

Presentación
x 100g :Código:  B02-143-05	x 500g :Código:  B02-143-06