Verde Brillante Bilis 2% Caldo.

Este medio está recomendado para el recuento de coliformes totales y fecales, por la técnica del número más probable.

Fundamento
En el medio de cultivo, la peptona aporta los nutrientes necesarios para el adecuado desarrollo bacteriano, la bilis y el verde brillante son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de bacterias Gram positivas y Gram negativas a excepción de coliformes, y la lactosa es el hidrato de carbono fermentable.
Es una propiedad del grupo coliforme, la fermentación de la lactosa con producción de ácido y gas.

Fórmula (en gramos por litro)

Instrucciones

  Bilis de buey deshidratada

20.0

Suspender 40 g del polvo deshidratado por litro de agua destilada. Disolver y distribuir 10 ml por tubo con campanita de Durham. Preparar además, el medio a doble concentración. Esterilizar en autoclave a 121°C durante 15 minutos.

  Lactosa

10.0

  Peptona

10.0

  Verde brillante

0.0133

pH final: 7.2 ± 0.2

Siembra
a.- Para el análisis de coliformes totales en muestras fluidas, sembrar por triplicado: 10 ml en caldo doble concentración y 1ml y 0,1 ml en caldo simple concentración.

Número
de tubos

Volumen de la muestra

Volumen de medio

Concentración
del medio

3

10 ml

10 ml

Doble

3

1 ml

10 ml

Simple

3

0.1 ml

10 ml

Simple

 b.- Para el análisis de coliformes totales en muestras sólidas (alimentos, cosméticos, fármacos), efectuar diluciones seriadas 10-1, 10-2 y 10-3 y sembrar cada dilución por triplicado en medio de cultivo simple concentración.

Número
de tubos

Dilución dela muestra

Volumen de la muestra

Volumen de medio

Concentración
del medio

3

10-1

1 ml

10 ml

Simple

3

10-2

1 ml

10 ml

Simple

3

10-3

1 ml

10 ml

Simple

c.- Para análisis de coliformes fecales, a partir de cada tubo positivo en el test presuntivo de coliformes totales (proveniente de Verde Brillante y Bilis 2% Caldo ó Mac Conkey Caldo ó Lauril Sulfato, utilizando la técnica del NMP), o a partir de colonias presentes en diferentes medios, que se presume sean coliformes, transferir una ansada a un tubo con Verde Brillante y Bilis al 2% caldo fresco, incubando a 45 +/- 0.5 ºC y otra en Agua Triptona con incubación a 35-37 ºC, para detectar la producción de indol.

Incubación
a- Para de coliformes totales: a 35-37 °C durante 24 horas.
b- Para coliformes (fecales): a 44.5-45.5 °C durante 24 horas.

Resultados
-Positivo: presencia de gas.
Con el número de tubos positivos, calcular el número mas probable. El resultado se expresa por gramos ó 100 ml de producto
-Negativo: ausencia de gas.

Microorganismos

Crecimiento

Gas

Indol#

Escherichia coli ATCC 25922

+

+*

+*

Enterobacter spp.

+

+

-*

Klebsiella pneumoniae ATCC 700603

+

+*

-*

Salmonella typhimurium ATCC 14028

+

-

-

Bacterias no fermentadores de lactosa

+

-

Variable

Staphylococcus aureus ATCC 25923

-

-

-

  +* ó -* 10-25% de cepas negativas o positivas
  # a partir de Agua Triptona

Características del medio
Medio preparado: verde esmeralda, transparente

Almacenamiento:
Medio deshidratado: a 10-35 ºC.
Medio preparado: a 2-8 ºC.

Presentación 

x 100g :Código:  B02-107-05

x 500g :Código:  B02-107-06