Verde Brillante Bilis 2% Caldo.

Este medio está recomendado para el recuento de coliformes totales y fecales, por la técnica del número más probable.

Fundamento
En el medio de cultivo, la peptona aporta los nutrientes necesarios para el adecuado desarrollo bacteriano, la bilis y el verde brillante son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de bacterias Gram positivas y Gram negativas a excepción de coliformes, y la lactosa es el hidrato de carbono fermentable.
Es una propiedad del grupo coliforme, la fermentación de la lactosa con producción de ácido y gas.

Fórmula (en gramos por litro)		Instrucciones
Bilis de buey deshidratada	20.0	Suspender 40 g del polvo deshidratado por litro de agua destilada. Disolver y distribuir 10 ml por tubo con campanita de Durham. Preparar además, el medio a doble concentración. Esterilizar en autoclave a 121°C durante 15 minutos.
Lactosa	10.0
Peptona	10.0
Verde brillante	0.0133
pH final: 7.2 ± 0.2

Siembra
a.- Para el análisis de coliformes totales en muestras fluidas, sembrar por triplicado: 10 ml en caldo doble concentración y 1ml y 0,1 ml en caldo simple concentración.

Número de tubos	Volumen de la muestra	Volumen de medio	Concentración del medio
3	10 ml	10 ml	Doble
3	1 ml	10 ml	Simple
3	0.1 ml	10 ml	Simple

 b.- Para el análisis de coliformes totales en muestras sólidas (alimentos, cosméticos, fármacos), efectuar diluciones seriadas 10^-1, 10^-2 y 10^-3 y sembrar cada dilución por triplicado en medio de cultivo simple concentración.

Número de tubos	Dilución dela muestra	Volumen de la muestra	Volumen de medio	Concentración del medio
3	10-1	1 ml	10 ml	Simple
3	10-2	1 ml	10 ml	Simple
3	10-3	1 ml	10 ml	Simple

c.- Para análisis de coliformes fecales, a partir de cada tubo positivo en el test presuntivo de coliformes totales (proveniente de Verde Brillante y Bilis 2% Caldo ó Mac Conkey Caldo ó Lauril Sulfato, utilizando la técnica del NMP), o a partir de colonias presentes en diferentes medios, que se presume sean coliformes, transferir una ansada a un tubo con Verde Brillante y Bilis al 2% caldo fresco, incubando a 45 +/- 0.5 ºC y otra en Agua Triptona con incubación a 35-37 ºC, para detectar la producción de indol.

Incubación
a- Para de coliformes totales: a 35-37 °C durante 24 horas.
b- Para coliformes (fecales): a 44.5-45.5 °C durante 24 horas.

Resultados
-Positivo: presencia de gas.
Con el número de tubos positivos, calcular el número mas probable. El resultado se expresa por gramos ó 100 ml de producto
-Negativo: ausencia de gas.

Microorganismos	Crecimiento	Gas	Indol#
Escherichia coli ATCC 25922	+	+*	+*
Enterobacter spp.	+	+	-*
Klebsiella pneumoniae ATCC 700603	+	+*	-*
Salmonella typhimurium ATCC 14028	+	-	-
Bacterias no fermentadores de lactosa	+	-	Variable
Staphylococcus aureus ATCC 25923	-	-	-

  +* ó -* 10-25% de cepas negativas o positivas
  # a partir de Agua Triptona

Características del medio
Medio preparado: verde esmeralda, transparente

Almacenamiento:
Medio deshidratado: a 10-35 ºC.
Medio preparado: a 2-8 ºC.

Presentación
x 100g :Código:  B02-107-05	x 500g :Código:  B02-107-06