TCBS Medio

Medio selectivo para el aislamiento y cultivo de Vibrio cholerae, Vibrio parahemolyticus y otras especies de Vibrio a partir de heces, agua y alimentos contaminados.
También es conocido como Agar Tiosulfato Citrato Bilis Sacarosa, o como Agar Selectivo para Vibrios.

Fundamento
En el medio de cultivo, el extracto de levadura, la peptona de carne y la tripteína aportan nutrientes para el desarrollo bacteriano. Es este, el medio selectivo más adecuado para el aislamiento de las especies de Vibrio, e inhibidor para la mayoría de las enterobacterias. Esta inhibición se basa en las altas concentraciones de tiosulfato y citrato, la presencia de bilis y un pH fuertemente alcalino. La degradación de la sacarosa es variable entre las especies de Vibrio y las colonias son verdes para las cepas que no la utilizan y amarillas para aquellas que producen ácido a partir de este azúcar. Esto es debido al viraje del color de los indicadores de pH azul de timol y azul de bromotimol, del color azul al amarillo en medio ácido. Es importante tener en cuenta, que la proporción de sacarosa en el medio está equilibrada de forma tal que no inhiba el crecimiento bacteriano por exceso de ácido.
El cloruro de sodio favorece el crecimiento de microorganismos. El tiosulfato de sodio aporta azufre y junto con el citrato férrico permiten la detección de producción de ácido sulfhídrico.
Aumentando la concentración de cloruro de sodio y disminuyendo la temperatura de incubación, pueden aislarse especies marinas sin importancia sanitaria.

Fórmula (en gramos por litro)

Instrucciones

Extracto de levadura

5.0

Suspender 89 g del polvo en un litro de agua destilada. Calentar hasta ebullición y hervir de 1 a 2 minutos. NO AUTOCLAVAR. Distribuir en placas de Petri estériles.

Peptona de carne

5.0

Tripteína

5.0

Citrato de sodio

10.0

Tiosulfato de sodio

10.0

Bilis de buey

8.0

Sacarosa

20.0

Cloruro de sodio

10.0

Citrato férrico

1.0

Azul de bromotimol

0.04

Azul de timol

0.04

Agar

15.0

pH final: 8.6 ± 0.2

Siembra

1-Materiales clínicos:
a-materia fecal: suspender 1 gramo de heces o el contenido del hisopo en 10 ml de Agua Peptonada Alcalina (B02-159-05, B02-159-06) e incubar de 6 a 8 horas a 35-37°C, en aerobiosis.
b-materiales provenientes de infecciones extraintestinales: no es necesario realizar enriquecimiento previo en Agua Peptonada Alcalina.

2-Agua: Filtrar de 1 a 10 litros (el volumen deseado) de agua con membrana de 0.22µ.Colocar la membrana en un recipiente conteniendo Agua Peptonada Alcalina e incubar de 6 a 8 horas a 35-37°C, en aerobiosis.

3-Alimentos: Licuar 25 g de la muestra con 225 ml de Agua Peptonada Alcalina (B02-159-05, B02-159-06) e incubar de de 6 a 8 horas a 35-37°C, en aerobiosis.

En todos los casos sembrar una alícuota del caldo de enriquecimiento en la superficie de una placa de TCBS, por estriado, para el aislamiento de colonias.

Incubación
En aerobiosis, durante 18-24 horas a 35-37°C.

Resultados  

Microorganismo

Crecimiento

Características de las colonias

Vibrio cholerae

Bueno

Amarillas de 2-3 mm de diámetro, de borde traslúcido

V. parahaemolyticus

Bueno

Centro verde azulado, borde traslúcido

V. alginolyticus

Bueno

Amarillas grandes

Aeromonas spp.

Inhibido

--

E. coli

Inhibido

--

Características del medio
Medio preparado: verde azulado.

Almacenamiento
Medio deshidratado: a 10-35 ºC.
Medio preparado: a 2-8 ºC.

Presentación 

x 100g :Código:  B02-167-05

x 500g :Código:  B02-167-06