Pseudomonas agar P.

Medio de cultivo utilizado para el aislamiento, la detección y la diferenciación de especies de Pseudomonas spp. en base a la producción de piocianina. Conocido también como medio King A.

Fundamento
En el medio de cultivo, la peptona de gelatina aporta los nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano, la glicerina favorece la producción de pigmentos, las sales de magnesio y potasio estimulan la producción de piocianina y piorrubina e inhiben la producción de fluoresceína.

Fórmula (en gramos por litro)

Instrucciones

  Peptona de gelatina

20.0

Suspender 46.4 g del polvo en un litro de agua destilada. Agregar 10 ml de glicerina. Calentar con agitación constante para homogeneizar el producto. Llevar a ebullición para que se disuelva por completo. Distribuir y esterilizar 15 minutos a 121 ºC.

  Sulfato de potasio

10.0

  Cloruro de magnesio

1.4

  Agar

15.0

pH final: 7.0 ± 0.2

Siembra
A partir de un cultivo puro de 18-24 horas, del cual se sospeche la presencia de Pseudomonas spp., tomar una colonia y estriar la superficie del medio.

Incubación
Durante 18-24 horas a 35-37 ºC, en aerobiosis.
Si no se observa crecimiento, reincubar a 25-30 ºC, o dejar a 22 ºC y observar diariamente hasta 7 días.

Resultados
Un resultado positivo es por observación de los pigmentos piocianina y/o piorrubina.
La producción de piocianina se observa como una zona color azul, azul-verdoso que rodea la colonia, o que se extiende en todo el medio de cultivo debido a la difusión del pigmento.
La producción de piorrubina se observa como una zona de color rojo alrededor de la colonia o que se extiende en todo el medio de cultivo debido a la difusión del pigmento.

Cepa

Crecimiento

Producción de Fluoresceína

Producción de Piocianina

P. aeruginosa

Bueno

+

+

P. fluorescens

Bueno

+

-

P. putida

Bueno

+

-

P. mallei

Bueno

-

-

P. stutzeri

Bueno

-

-

S. maltophilia

Bueno

-

-

B. cepacia

Bueno

-

-

Escherichia coli

Bueno

-

-

Limitaciones
- La ausencia de piocianina no descarta que el microorganismo aislado sea P. aeruginosa.
- Bajas cantidades de piocianina pueden no ser evidenciadas, por eso, ante la sospechade su presencia, se recomienda agregar al medio de cultivo unas gotas de cloroformo, para exaltar la visualización del pigmento.
- La presencia concomitante de piorrubina y/o piomelanina, puede afectar la visualización del color característico de la piocianina.
- La producción de pigmento, puede aumentarse dejando los tubos conteniendo medio de cultivo a 22 ºC luego de haberlos incubado previamente toda la noche a 35-37 ºC.
 
Características del medio
Medio preparado color blanco-amarillo transparente

Almacenamiento:
Medio deshidratado: a 10-35 ºC.
Medio preparado: a 2-8 ºC.

Presentación 

x 100g :Código:  B02-209-05

x 500g :Código:  B02-209-06