O.F. Medio Basal de Hugh & Leifson.

Medio de cultivo, que al ser suplementado con hidratos de carbono, se usa para determinar el metabolismo oxidativo-fermentativo de las bacterias Gram negativas. Esta prueba es útil para diferenciar especies bacterianas. También, permite determinar movilidad y producción de gas.

Fundamento
El medio basal O.F., fue desarrollado por Hugh y Leifson, para evidenciar la importancia del significado taxonómico del metabolismo oxidativo-fermentativo de los hidratos de carbono por las bacterias Gram negativas.
Cuando un microorganismo es inoculado en 2 tubos del medio O.F. conteniendo el mismo hidrato de carbono, y uno de los 2 tubos es sellado con vaselina o parafina antes de la incubación, se puede diferenciar bien el metabolismo oxidativo o fermentativo, así como la no utilización de un hidrato de carbono por la bacteria en estudio.
En el medio de cultivo, el agregado de una alta concentración de un determinado hidrato de carbono, hace que los microorganismos utilicen para su desarrollo dicha sustancia, evitando que bacterias aeróbicas utilicen la tripteína presente con la consecuente producción de reacción alcalina, la que se neutraliza por la ligera acidez producida por un microoganismo oxidativo.
El fosfato dipotásico agrega capacidad reguladora, el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico, y el azul de bromotimol es el indicador de pH que vira al color amarillo en medio ácido. El contenido de agar, da la propiedad de ser un medio semisólido, y permite determinar la movilidad y la distribución de los productos ácidos en el medio de cultivo. La glucosa es el hidrato de carbono mas frecuente que se agrega al medio basal O.F., pero también pueden agregarse otros azúcares, como ser, lactosa, sacarosa, maltosa, manitol o xilosa, entre otros.
Por oxidación o fermentación de un determinado hidrato de carbono, se acidifica el medio y el indicador de pH vira del color verde al amarillo.

Fórmula (en gramos por litro)

Instrucciones

Tripteína

2.0

Suspender 9.8 g del polvo por litro de agua destilada. Mezclar. Calentar con agitación frecuente y hervir 1 minuto. Esterilizar a 121°C durante 15 minutos. A 100 ml de base esteril, agregar 10 ml de la solucion esteril del hidrato de carbono al 10% (alternativamente agregar el hidrato de carbono antes de esterilizar y autoclavar a 118°C durante 10 minutos).

Cloruro de sodio

5.0

Fosfato dipotásico

0.3

Agar

2.50

Azul de bromotimol

0.03

pH final: 7.1 ± 0.1

Siembra
Inocular, por cada hidrato de carbono que se use y para cadamicroorganismo en estudio, 2 tubos conteniendo el medio O.F. y el mismo hidrato de carbono. Rotular un tubo con la inscripción: “Abierto” y otro tubo con la inscripción: “Cerrado” (sellado).
A partir de un cultivo puro de 18-24 horas del microorganismo en estudio, preparar un inóculo poco denso y sembrar utilizando aguja de inoculación. Picar hasta aproximadamente 0.6 mm del fondo.
Agregar al tubo “cerrado” (sellado) 1 o 2 ml de vaselina o parafina fundida estéril, para excluir el oxígeno.
Luego, tapar ambos tubos con las tapas apropiadas.

Incubación
Durante 48 horas, a 35-37 ºC, en aerobiosis.
Algunos microorganismos requieren hasta 4 días, y otros hasta 14 días de incubación.


Resultados
El uso del hidrato de carbono, ya sea por fermentación u oxidación, produce acidez en el medio, con el consecuente viraje del color verde al amarillo.

a-Microorganismos oxidativos del hidrato de carbono en estudio: producen una reacción ácida solo en el tubo “abierto”.Presentan poco o nulo desarrollo y ausencia de producción de ácido en el tubo “cerrado”.

b-Microorganismos fermentadores del hidrato de carbono en estudio: producen una reacción ácida en ambos tipos de tubos.

c-Microorganismos que no utilizan el hidrato de carbono en estudio: no producen cambios ninguno de los 2 tubos, los cuales permanecen verdes.

Se debe informar: producción de ácido (A), ácido con gas (AG), alcalino (K) o sin cambio (-).
También, puede informarse si el organismo es móvil, cuando crece lejos de la línea de inoculación.

Las reacciones típicas son las siguientes:

Reacción

Tubos con reacción

Tubo Abierto

Tubo cerrado

Oxidación

Abierto

 

Amarillo (A)

Verde (-)

Fermentación

Cerrado Cerrado

Amarillo Amarillo (AG)

Amarillo (A) Amarillo (AG)

Sin oxidación o fermentación

Ninguna

 

Azul o Verde (-)

Verde (-)


Resultados: Medio de cultivo suplementado con 1% de dextrosa

Microorganismo

Tubo Abierto

Tubo cerrado

A. calcoaceticus ATCC 19606

A

K

E. coli ATCC 25922

AG

AG

S. flexneri ATCC 12022

A

A

P. aeruginosa ATCC 27853

A

K

Características del medio
Medio preparado: verde.


Almacenamiento
Medio deshidratado: a 10-35 ºC.
Medio preparado: a 2-8 ºC.

Presentación 

x 100g :Código:  B02-175-05

x 500g :Código:  B02-175-06