MR-VP Medio


Medio utilizado para la realización del ensayo de Rojo de Metilo y Voges Proskauer.
Es particularmente útil para la clasificación de enterobacterias.

Fundamento
En el medio de cultivo, la pluripeptona aporta los nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano y la glucosa es el hidrato de carbono fermentable.
La glucosa puede ser metabolizada por los microorganismos, a través de distintas vías metabólicas. Según la vía utilizada, se originarán productos finales ácidos (ácido láctico, ácido acético, ácido fórmico), o productos finales neutros (acetil metil carbinol).
Esta diferencia en el metabolismo bacteriano, podría ser reconocida por la adición de un indicador como rojo de metilo, para revelar la presencia de productos ácidos, y por la adición de alfa naftol e hidróxido de potasio para evidenciar la presencia de productos finales neutros.
Voges y Proskauer, describieron una coloración rojiza que aparecía después de adicionar hidróxido de potasio a los cultivos de ciertos microorganismos en medio con glucosa. Esta coloración se debe a la oxidación del acetilmetil carbinol a diacetilo el cual reacciona con la peptona del medio para dar un color rojo.

Fórmula (en gramos por litro)		Instrucciones
Pluripeptona	7.0	Suspender 17 g del polvo por litro de agua destilada. Calentar suavemente agitando hasta disolver. Distribuir y esterilizar en autoclave a 118-121°C durante 15 minutos.
Glucosa	5.0
Fosfato dipotásico	5.0
pH final: 6.9 ± 0.2

Siembra
Por inoculación directa, a partir del cultivo en estudio.

Incubación
En aerobiosis, a 35-37°C por 3 días.

Revelado de pruebas bioquímicas

a-Prueba del rojo de metilo:

Añadir unas gotas de una solución de rojo de metilo al 0.04%, observar el color del medio.

b-Prueba del Voges Proskauer:

Añadir 0,6 ml de alfa naftol al 5% en alcohol etílico absoluto y 0.2 ml de hidróxido de potasio al 40% a 2.5 ml de cultivo. Agitar vigorosamente el tubo, y dejar a temperatura ambiente durante 10-15 minutos. Observar el color de la superficie del medio.

Resultados

1-Prueba del rojo de metilo:
Positivo: color rojo.
Negativo: color amarillo.

2-Prueba de Voges Proskauer:
Positivo: desarrollo de un color rojo en pocos minutos después de una completa agitación del tubo.
Negativo: ausencia de color rojo.

Microorganismo	Crecimiento	RM	VP
E. coli ATCC 25922	Bueno	+	-
K. pneumoniae ATCC 700603	Bueno	-	+
P. mirabilis ATCC 43071	Bueno	+	-
S. typhimurium ATCC 14028	Bueno	+	-
Citrobacter freundii	Bueno	+	-
Enterobacter aerogenes	Bueno	-	+

Limitaciones
En algunas cepas positivas para la prueba VP, pueden no desarrollar el color rojo en la superficie mediante el revelado por la metodología descripta anteriormente. En estos casos, se recomienda calentar el medio de cultivo para favorecer el desarrollo de color rojo.


Características del medio
Medio preparado: ámbar claro, transparente sin precipitado.

Almacenamiento
Medio deshidratado: a 10-35 ºC.
Medio preparado: a 2-8 ºC.

Presentación
x 100g :Código:  B02-139-05	x 500g :Código:  B02-139-06