Moeller Medio Decarboxilasa Base.

Medio base, que al ser suplementado con lisína, arginina u ornitina, es útil para la diferenciación de bacilos Gram negativos, basándose en la producción de lisina decarboxilasa, argina dehidrolasa y ornitina decarboxilasa respectivamente.

Fundamento
En 1955, Moeller introdujo este medio de cultivo, para evaluar la producción de lisina y ornitina decarboxilasa y de arginina dehidrolasa. Estas pruebas, junto a otros test bioquímicos, permiten diferenciar a las Enterobacterias y otros bacilos Gram negativos tales como Aeromonas, Plesiomonas y Vibrio spp. La producción de ornitina decarboxilasa, es una prueba clave para diferenciar el grupo Klebsiella-Enterobacter. Klebsiella spp. es inmóvil y no produce ornitina decarboxilasa, mientras que Enterobacter es móvil, y excepto E. agglomerans, generalmente produce esta enzima.
En el medio base de Moeller, la peptona y el extracto de carne suministran la fuente de carbono y nitrógeno necesarias para el crecimiento bacteriano. El piridoxal actúa como coenzima en la decarboxilación de los aminoácidos. La glucosa es el hidrato de carbono fermentable. El púrpura de bromocresol y el rojo de cresol son indicadores del pH.
Los aminoácidos lisina, ornitina y arginina, se agregan al medio basal, en concentración final al 1%
(L-aminoácidos), o al 2% (DL-aminoácidos) para detectar la producción de enzimas específicas para estos sustratos.
Cuando el medio se inocula con una bacteria capaz de fermentar glucosa, se produce ácido que disminuye el pH y cambia el color del medio del púrpura al amarillo. La condición ácida estimula la actividad decarboxilasa. Si el organismo produce la enzima apropiada, es degradado el aminoácido a su correspondiente amina. Por decarboxilación de lisina, se produce cadaverina, mientras que la decarboxilación de ornitina forma putrescina. La arginina es hidrolizada a ornitina y luego es decarboxilada a putrescina.
La presencia de estas aminas, eleva el pH del medio, cambiando el color del indicador del amarillo al púrpura o violeta.
Si el organismo en estudio, no produce la enzima decarboxilasa o dehidrolasa, el medio permanece ácido (amarillo) por fermentación de la glucosa.

Fórmula (en gramos por litro)		Instrucciones
Peptona de carne	5.0	Suspender 10,5 g del polvo por litro de agua destilada. Reposar 5 minutos y mezclar hasta uniformar. Agregar L-aminoácidos al 1% (si es DL agregar 2%) según se desee. No agregar al tubo control. Calentar agitando frecuentemente y hervir 1 minuto hasta disolver. Distribuir y esterilizar 10 minutos a 121°C.
Extracto de carne	5.0
Glucosa	0.5
Piridoxal	0.005
Rojo de cresol	0.005
Púrpura de bromocresol	0.01
pH final: 6.0 ± 0.2

Siembra
A partir de un cultivo puro de 24 horas, inocular el caldo suplementado con uno de los tres aminoácidos, distribuyendo la siembra a través del medio (Tubo Prueba). Cada cepa aislada, además debe ser sembrada en paralelo, en un tubo de medio basal que no contiene aminoácidos (Tubo Control).
Agregar a todos los tubos, 1 ml de aceite mineral.


Incubación
Incubar los tubos con las tapas flojas a 35-37 °C, en aerobiosis.
Examinar, para evaluar crecimiento y reacciones de decarboxilación, a las 24-48-72 y 96 horas.


Resultados
El medio se torna amarillo inicialmente si la glucosa es fermentada, y luego gradualmente se torna púrpura si la actividad decarboxilasa o dehidrolasa ocurre y se eleva el pH del medio.
Para cada microorganismo en estudio, comparar el color presente en los tubos con medio conteniendo los respectivos aminoácidos (Tubos Prueba), con el color presente en el tubo control.

Para cada microorganismo y para cada aminoácido en estudio:

1-Resultado positivo:

-Tubo prueba: color púrpura o violeta.
-Tubo control: color amarillo.

2-Resultado negativo:

-Tubo prueba y tubo control: color amarillo.

3-Resultado inválido:

-Tubo control púrpura o violeta.

Microorganismos	Crecimiento	Lisina Decarboxilasa	Ornitina Decarboxilasa	Arginina Dehidrolasa
E. coli ATCC 25922	Bueno	+	+	-
K. pneumoniae ATCC 700603	Bueno	+	-	-
Enterobacter cloacae	Bueno	-	+	+
P. mirabilis ATCC 43071	Bueno	-	+	-
S. flexneri ATCC 12022	Bueno	-	-	-
S. typhimurium ATCC 14028	Bueno	+	+	+

Limitaciones
-Un color gris puede indicar reducción del indicador más que la formación de productos finales alcalinos.
-Para obtener las reacciones apropiadas, los tubos inoculados deben protegerse del aire con una capa de aceite mineral. La exposición al aire puede causar alcalinización en la superficie del medio, lo que originaría que un organismo decarboxilasa negativo de resultado falso positivo.

Características del medio
Medio preparado: púrpura.


Almacenamiento
Medio deshidratado: a 10-35 ºC.
Medio preparado: a 2-8 ºC.

Presentación
x 100g :Código:  B02-190-05	x 500g :Código:  B02-190-06