Lisina Hierro Agar.

Medio de cultivo utilizado para diferenciar microorganismos, especialmente Salmonella spp., basado en la decarboxilación / desaminación de la lisina y en la producción de ácido sulfhídrico.


Fundamento
En el medio de cultivo, la peptona y el extracto de levadura aportan los nutrientes para el desarrollo bacteriano. La glucosa es el hidrato de carbono fermentable, y la lisina es el sustrato utilizado para detectar la presencia de las enzimas decarboxilasa y deaminasa. El citrato de hierro y amonio, y el tiosulfato de sodio, son los indicadores de la producción de ácido sulfhídrico. El purpura de bromocresol, es el indicador de pH, el cual es de color amarillo a pH igual o menor a 5.2, y de color violeta a pH igual o mayor a 6.8.
Por decarboxilación de la lisina, se produce la amina cadaverina, que alcaliniza el medio y esto produce el viraje del indicador al color violeta. La decarboxilación de la lisina, tiene lugar en medio ácido, por lo que es necesario que la glucosa sea previamente fermentada.
Los microorganismos que no producen lisina decarboxilasa, pero que son fermentadores de la glucosa, producen un viraje de la totalidad del medio de cultivo al amarillo, pero a las 24 hs de incubación se observa el pico de color violeta debido al consumo de las peptonas, y el fondo amarillo.
La producción de sulfuro de hidrógeno, se visualiza por el ennegrecimiento del medio debido a la formación de sulfuro de hierro.
Las cepas de los géneros Proteus, Providencia y algunas cepas de Morganella, desaminan la lisina, esto produce un ácido alfa-ceto-carbónico, el cual, con la sal de hierro y bajo la influencia del oxígeno forma un color rojizo en la superficie del medio.

Fórmula (en gramos por litro)

Instrucciones

  Peptona de gelatina

5.0

Suspender 35 g del medio deshidratado en un litro de agua destilada. Dejar embeber unos 15 minutos. Calentar cuidadosamente, agitando con frecuencia y hervir durante un minuto hasta la disolución completa. Distribuir y esterilizar a 121°C durante 15 minutos. Enfriar en pico de flauta dejando un fondo vertical apto para la punción.

  Extracto de levadura

3.0

  Glucosa

1.0

  Lisina

10.0

  Citrato de hierro y amonio

0.5

  Tiosulfato de sodio

0.04

  Púrpura de bromocresol

0.02

  Agar

15.0

pH final: 6.7 ± 0.2


Siembra
Por punción profunda con aguja de inoculación.

Incubación
En aerobiosis, durante 24 horas a 35-37 °C.

Resultados

1-
Decarboxilación de la lisina:

-Prueba Positiva: Pico violeta/fondo violeta.
-Prueba Negativa: Pico violeta/fondo amarillo.

2-Desaminación de la lisina:

Pico rojizo/fondo amarillo. Esto sucede con cepas del género Proteus, Providencia y alguna cepas de Morganella spp.

3-Producción de ácido sulfhídrico:

-Prueba positiva: Ennegrecimiento del medio (especialmente en el límite del pico y fondo)

Microorganismos

Color en el pico de flauta

Color en la base del tubo

Ennegrecimiento del medio

Proteus mirabilis ATCC 43071

Rojo

Amarillo

Negativo

Salmonella typhimurium ATCC 14028

Púrpura

Púrpura

Positivo

Salmonella enteritidis ATCC 13076

Púrpura

Púrpura

Positivo

Providencia spp.

Rojo

Amarillo

Negativo

Citrobacter freundii

Púrpura

Amarillo

Positivo

Morganella spp.*

Rojo

Amarillo

Negativo

Edwarsiella spp.

Púrpura

Púrpura

Positivo

Klebsiella pneumoniae ATCC 700603

Púrpura

Púrpura

Negativo

Escherichia coli ATCC 25922

Púrpura

Púrpura

Negativo

*Algunas especies de Morganella spp., pueden desaminar la lisina.

Características del medio
Medio preparado: color violeta.

Almacenamiento
Medio deshidratado: a 10-35 ºC.
Medio preparado: a 2-8 ºC.

Presentación 

x 100g :Código:  B02-106-05

x 500g :Código:  B02-106-06