Bilis Esculina Con Azida Agar.

Medio de cultivo utilizado para el aislamiento e identificación de estreptococos del grupo D.

Fundamento
Con el objetivo de lograr un medio mas selectivo, pero que mantenga la propiedad de permitir un rápido crecimiento de estreptococos grupo D, se modifica la fórmula del medio Bilis Esculina Agar,por el agregado de azida sódica y la disminución de la concentración de bilis.
En el medio de cultivo, el extracto de carne, la proteosa peptona y la tripteína, aportan los nutrientes necesarios para el adecuado desarrollo bacteriano. La bilis de buey, inhibe el desarrollo de la flora Gram positiva excepto los estreptococos grupo D, y la azida sódica inhibe el desarrollo de microorganismos Gram negativos. El citrato de hierro y amonio aporta iones Fe³⁺, el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico, y el agar es el agente solidificante.
Los estreptococos del grupo D, crecen rápidamente en el agar bilis esculina e hidrolizan la esculina, que en presencia de iones hierro forman un compuesto de color verde oliva hasta negro.
Además, ha sido recomendado, el agregado a este medio de cultivo, de 6 µg/ml de vancomicina para aislar enterococos resistentes a este antibiótico a partir de muestras altamente contaminadas. El aislamiento de dichos microorganismos, es particularmente importante en medio hospitalario ya que los pacientes deben ser aislados, restringir sus movimientos dentro del hospital, extender las medidas de cuidado y el tratamiento con una variedad de agentes antimicrobianos, antes que pueda demostrarse que el paciente este libre de este microorganismo.

Fórmula (en gramos por litro)		Instrucciones
Agar	15.0	Suspender 56.65 g del polvo por litro de agua destilada. Reposar 5 minutos y mezclar hasta uniformar. Calentar agitando frecuentemente y hervir 1 minuto hasta disolver. Distribuir y esterilizar 15 minutos a 121 ºC
Azida sódica	0.15
Bilis de buey	10.0
Citrato de hierro y amonio	0.5
Cloruro de sodio	5.0
Esculina	1.0
Extracto de carne	5.0
Proteosa peptona Nº 3	3.0
Tripteína bacteriológica	17.0
pH final: 7.2 ± 0.2

Siembra
Sembrar el material en estudio, en tubo o placa, según la preferencia.

Incubación
Hasta 3 días, a 35-37 ºC, en aerobiosis.

Resultados

Microorganismos	Crecimiento	Hidrólisis de la Esculina	Oscurecimiento
Enterococcus faecalis ATCC 29212	Bueno	+	+
Proteus mirabilis ATCC 43071	Inhibido	--	--
Escherichia coli ATCC 25922	Inhibido	--	--

Limitaciones
-Staphylococcus aureus y Staphylococcus epidermidis, pueden desarrollar en este medio de cultivo, originando colonias muy pequeñas (menores a 1 mm), de color grisáceo, debido a que no hidrolizan la esculina.
-La única bacteria que ennegrece el medio además de los estreptococos grupo D, es la Listeria monocytogenes.
A las 18-24 horas presenta zonas rojizas-amarronadas a negras alrededor de las colonias puntiformes.
A las 48 horas, aparecen colonias grisáceas, que no mantienen el mismo color que los estreptococos grupo D en este período corto de incubación.

Características del medio
Medio preparado: ámbar u oscuro ligeramente opalescente. El medio con esculina tiene un tinte azulado.


Almacenamiento
Medio deshidratado: a 10-35 ºC.
Medio preparado: a 2-8 ºC.

Presentación
x 100g :Código:  B02-197-05	x 500g :Código:  B02-197-06