Bacillus Cereus Selectivo Agar.
Medio diagnóstico selectivo utilizado para el aislamiento y recuento de Bacillus cereus en alimentos.
Fundamento
Bacillus cereus, ha sido implicado en toxoinfecciones alimentarias, particularmente asociado al consumo de arroz contaminado, y también en algunos procesos infecciosos en seres humanos y animales.
En el medio de cultivo, el contenido de peptona es bajo (0.1%), y la adición de piruvato de sodio y emulsión de yema de huevo mejora el aislamiento y esporulación de esta bacteria. Para verificar la utilización del manitol, se usa un indicador de pH, azul de bromotimol. Este medio es selectivo, por el agregado del suplemento para Bacillus cereus (código B03-606-32) con el que se obtiene una concentración final de 100 U de Polimixina B por ml de medio.
Fórmula (en gramos por litro)
Instrucciones
Peptona de carne
1.0
Suspender 40,0 g de polvo en 950 ml de agua destilada. Dejar reposar 5 a 10 minutos. Calentar con agitación frecuente hasta completar disolución. Esterilizar por autoclave a 121°C durante 15 minutos. Enfriar a 50°C y asépticamente agregar el contenido de 1 vial de suplemento selectivo para Bacillus cereus Britania código B03-606-32 reconstituido con 2 ml de agua destilada estéril. Luego agregar 50 ml de Emulsión Yema de Huevo Britania (código B03-602-61). Mezclar bien y distribuir en placas de Petri estériles.
Manitol
10.0
Cloruro de sodio
2.0
Sulfato de magnesio
0.1
Fosfato disódico
2.5
Fosfato monopotásico
0.25
Azul de bromotimol
0.12
Piruvato de sodio
10.0
Agar
14.0
pH final: 7.2 ± 0.2
Siembra
Homogeneizar 10 g de la muestra de alimento en 90 ml de agua peptonada 0.1%. Efectuar diluciones y sembrar 0.1 ml sobre la superficie del medio de cultivo.
Incubación
En aerobiosis, a 35-37 ºC durante 24 horas.
Resultados
Microorganismos
Crecimiento
Bacillus cereus ATCC 10876
Bueno
Staphylococcus aureus ATCC 25923
Bueno
Escherichia coli ATCC 25922
Inhibido
Bacillus subtilis ATCC 6633
Bueno
El diagnóstico primario se basa en la morfología y color de la colonia, en la precipitación de la lecitina hidrolizada y en la falta de utilización del manitol por Bacillus cereus.
Las colonias típicas de B. cereus son crenadas, filamentosas de aproximadamente 5 mm de diámetro a las 24 horas de incubación, y tienen un color turquesa (peacock blue) rodeado por un precipitado de hidrólisis de yema de huevo. A las 48 horas de incubación presentan el color con centro grisáceo.
Estos hallazgos diferencian B. cereus de B. subtilis y B. licheniformis, pero pueden no diferenciar B. cereus de otras especies de Bacillus, tales como B. thuringiensis, B. anthracis, B. mycoides, y en estos casos, será necesario realizar mas ensayos para su identificación.
Otros microorganismos que crecen bien en el medio son: Staphylococcus aureus, Serratia marcescens y Proteus vulgaris, los cuales se diferencian de B. cereus por la forma de la colonia, el color, y porque producen una reacción de aclaramiento sobre la yema de huevo, a diferencia del precipitado que produce B. cereus.
Bacillus megaterium y Bacillus coagulans son completamente inhibidos en este medio de cultivo.
Se recomienda la realización de un examen microscópico para evaluar la presencia de glóbulos de lípidos en las células vegetativas, debido a que es una prueba rápida y confirmatoria de B. cereus.
Características del medio:
Medio preparado: verde manzana
Almacenamiento:
Medio deshidratado: a 10-35 ºC.
Medio preparado: a 2-8 ºC.
Presentación
x 100g :Código: B02-161-05
x 500g :Código: B02-161-06