5 ) Pruebas de sensibilidad a los antibióticos

A ) Streptococcus pneumoniae

Se determina la sensibilidad a la penicilina , cefotaxima (o ceftriaxona), eritromicina, co-trimoxazol y opcionalmente a vancomicina, aunque no estén descriptas cepas resistentes a este antibiótico. & Penicilina

A ) Por difusión:
I- se utiliza un método de “screening” que emplea discos de oxacilina de 1 g. Se hisopa una placa de agar Mueller Hinton suplementado con 5 % de sangre de carnero. Se coloca el disco de oxacilina y se incuba 24 horas en atmósfera con 5 % de CO2. Interpretación: Halos > ó = a 20 mm sensible < ó = a 19 mm resistente o intermedio
II- Etest: sobre una placa de las mismas características que en el caso anterior, se coloca una tira reactiva que está impregnada de concentraciones crecientes de penicilina. Luego de la incubación se observa la zona de inhibición que tiene forma elíptica y se determina la CIM leyendo la línea en donde esa zona de inhibición intercepta la tira reactiva .

B ) Por dilución: se siguen las normas para micro o macrodilución. Las cepas sensibles tienen una CIM < ó = a 0.06 g / ml, las intermedias entre 0.12 y 1 g / ml y las resistentes > ó = a 2 g / ml. & Cefotaxima. ceftriaxona y cefuroxima: se determina solamente por el método de dilución en las condiciones antes descriptas para penicilina. (ver normas de NCCLS ). Pueden emplearse también las tiras de E-test en las mismas placas utilizadas para penicilina. & Eritromicina, co-trimoxazol. cloranfenicol y vancomicina: su sensibilidad está normatizada para los métodos de difusión y de dilución en las condiciones antes descriptas para penicilina. La sensibilidad y resistencia a azitromicina y claritromicina pueden ser extrapoladas de los resultados observados con eritromicina.

B ) Haemophilus influenzae

Se debe determinar la sensibilidad a ampicilina, ampicilina sulbactam , cloranfenicol, co-trimoxazol, cefuroxima y cefaclor. No se han detectado aislamientos resistentes a cefotaxima, cefixima, ceftibuten, ceftriaxona , ciprofloxacina ni azitromicina. La sensibilidad a los distintos antimicrobianos puede determinarse por difusión o por dilución siguiendo las normas de la NCCLS.

& Ampicilina: además del método de difusión se debe realizar una prueba rápida para detectar las ß lactamasas. Existen tres pruebas rápidas: La acidimétrica , la iodométrica y la cromogénica. Las dos primeras utilizan un indicador colorimétrico para detectar la presencia del ácido peniciloico producido como consecuencia de la hidrólisis de la penicilina por las ß lactamasas. El método acidimétrico usa como sustrato penicilina en un buffer citratado con rojo de fenol como indicador. Una disminución del pH debido a la presencia de ácido peniciloico da como resultado un cambio de color del rojo al amarillo. El sustrato en el método iodométrico es penicilina en un buffer fosfatado con el agregado de yodo y almidón. El ácido peniciloico reduce al yodo e impide que éste se una al almidón (reacción negativa , incolora). Si no se produce la hidrólisis de la penicilina el yodo y el almidón forman un complejo violáceo. (reacción positiva) . El tercer método usa nitrocefin que es una cefalosporina cromogénica que exhibe un rápido cambio de color del amarillo al rojo cuando el enlace amida del anillo beta lactámico es hidrolizado por una beta lactamasa.
Método: añadir una gota de nitrocefin a un portaobjetos limpio. Utilizando un ansa estéril, tomar una colonia de la placa y emulsionarla en la gota de nitrocefin. El resultado es positivo si se produce el cambio de color a los 30 minutos (hay que proteger el portaobjetos de la desecación durante el período de espera). También se pueden usar discos comerciales.

& Cloranfenicol: la resistencia a cloranfenicol puede ser mediada por una enzima, la cloranfenicol acetil transferasa. Para detectarla se hisopa media placa de agar chocolate con una suspensión de H. influenzae. Se hacen dos estrías, una sobre la media placa hisopada y otra sobre la media placa no hisopada, con una cepa patrón de S. aureus ATCC 25923. En la mitad de dichas estrías se coloca un disco de cloranfenicol. Se incuba a 37 ° C durante 24 horas y se miden los halos de inhibición del crecimiento de la cepa de S. aureus alrededor de los discos. Una disminución de dicha zona, en la mitad de la placa hisopada con el aislamiento de H. influenzae, indica destrucción enzimática del antibiótico. Una prueba similar puede servir para determinar por método microbiológico la presencia de ß lactamasa. Para ese fin se usa la misma cepa patrón de S. aureus y un disco de ampicilina

C ) Moraxella catarrhalis

Para determinar la sensibilidad a penicilina, ampicilina y amoxicilina es suficiente la realización de una prueba de detección de beta lactamasa, pero sólo es aceptable el método del nitocefin. M. catarrhalis es sensible a cefalosporinas, ampicilina / sulbactam, amoxicilina / clavulánico, imipenem y eritromicina. Se han detectado cepas resistentes a cotrimoxazol por lo que su sensibilidad deberá determinarse por pruebas de difusión con discos. Se usa agar Mueller Hinton y se incuba a 35 ° C siguiendo las normas del NCCLS .

D ) Streptococcus pyogenes

Ver sección de exudados de fauces

E ) Staphylococcus aureus

La sensibilidad a los distintos antimicrobianos se determina por el método de difusión siguiendo las normas de NCCLS